人HA tag標(biāo)簽(HA tag)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

　　本試劑盒僅供研究使用。 貨號(hào)：BS1537

　　檢測(cè)范圍：

　　96T

　　12pg/ml -420pg/ml

　　使用目的：

　　本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 HA tag 標(biāo)簽(HA tag)含量。

　　實(shí)驗(yàn)原理

　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人 HA tag 標(biāo)簽(HA tag)水平。用純化的人 HA tag 標(biāo)簽(HA tag)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 HA tag 標(biāo)簽(HA tag)，再與 HRP 標(biāo)記的 HA tag 標(biāo)簽(HA tag)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng) 過(guò)洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn) 化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 HA tag 標(biāo)簽(HA tag)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人 HA tag 標(biāo)簽(HA tag)濃度。

　　試劑盒組成

　　標(biāo)本要求

　　1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能 馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

　　2.不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

　　操作步驟

　　1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀 釋。

　　400pg/ml

　　5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

　　150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 200pg/ml

　　4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

　　150μl 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 100pg/ml

　　3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

　　150μl 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50pg/ml

　　2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

　　150μl 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 25pg/ml

　　1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

　　150μl 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl， 然后再加待測(cè)樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

　　4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。

　　7. 溫育：操作同 3。

　　8. 洗滌：操作同 5。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

　　10 分鐘.

　　10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

　　11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

　　操作程序總結(jié)：

　　人HA tag標(biāo)簽(HA tag)酶聯(lián)免疫分析試劑盒計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)

　　準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，

　　即為樣品的實(shí)際濃度。

　　注意事項(xiàng)

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 1 小時(shí)后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完， 板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

　　3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定，計(jì) 算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物請(qǐng)避光保存。

　　7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

　　9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

　　保存條件及有效期

　　1.試劑盒保存：;2-8℃。

　　2.有效期：6 個(gè)月

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